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液相色譜流動(dòng)相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。
選好填料(固定相)后,強溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少,相應的容量因子k降低;而較弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面吸附增加,相應的容量因子k升高。因此,k值是流動(dòng)相組成的函數。塔板數N一般與流動(dòng)相的粘度成反比。所以選擇流動(dòng)相時(shí)應考慮以下幾個(gè)方面:
?、倭鲃?dòng)相應不改變填料的任何性質(zhì)。低交聯(lián)度的離子交換樹(shù)脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機相會(huì )溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統。酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。
?、诩兌?。色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過(guò)有關(guān),特別是當溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
?、郾仨毰c檢測器匹配。使用UV檢測器時(shí),所用流動(dòng)相在檢測波長(cháng)下應沒(méi)有吸收,或吸收很小。當使用示差折光檢測器時(shí),應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相,以提高靈敏度。
?、苷扯纫停☉?lt;2cp)。高粘度溶劑會(huì )影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì),降低柱效,還會(huì )使柱壓降增加,使分離時(shí)間延長(cháng)。選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
?、輰悠返娜芙舛纫m宜。如果溶解度欠佳,樣品會(huì )在柱頭沉淀,不但影響了純化分離,且會(huì )使柱子惡化。
?、迾悠芬子诨厥?。應選用揮發(fā)性溶劑。