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含有緩沖成分的移動(dòng)相基本上可以通過(guò)兩種途徑來(lái)配制:
在與有機相組分混合前完成包括pH調節步驟在內的所有緩沖溶液配置過(guò)程。
在緩沖溶液和有機相組分混合之后調節總溶液pH值。
在水溶液體系中pH是一個(gè)很好確定的參數,但是在含有部分有機相的溶劑中pH值就沒(méi)那么好確定了,或者說(shuō)質(zhì)子濃度就不容易測準了。
因此建議在配制緩沖水溶液時(shí),就調好pH值,用規格為0.4微米的濾膜過(guò)濾后再同有機相組分混合。需要注意以下幾點(diǎn):
pKa值兩側+/-1范圍內是zui有效的緩沖區域,以此為參考選擇正確的緩沖系統。
如果需要將高濃度緩沖液同有機相組分混合,請考慮緩沖溶質(zhì)沉淀析出的可能性。
在使用前總是選用規格為4微米的濾膜對緩沖液進(jìn)行過(guò)濾。
注意純水相緩沖液中細菌和真菌滋生的可能性。
在加入有機相組分時(shí),整體溶液pH值通常會(huì )產(chǎn)生一些漂移,無(wú)機緩沖體系(例如磷酸鹽)的pH值會(huì )有所上升,而有機緩沖體系(例如乙酸)pH值則會(huì )有所下降。