人工合成著(zhù)色劑主要以苯、甲苯等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過(guò)磺化、硝化、鹵化、偶氮化等一系列有機反應而制得的人工色素。合成著(zhù)色劑能有效改善食品色澤，被廣泛應用于食品加工中，中國食品添加劑使用衛生標準列入的合成色素主要有胭脂紅、莧菜紅、日落黃、赤蘚紅、檸檬黃、新紅、靛藍、亮藍等等。

肉制品生產(chǎn)中，著(zhù)色劑雖然可以改變肉制品的色澤，增加消費者的購買(mǎi)欲和食欲，然而它也可以掩蓋肉制品中不新鮮原料肉，成為不法銷(xiāo)售者獲取非法利益的手段。合成著(zhù)色劑少量食用可經(jīng)肝腎代謝排出體外，但是若長(cháng)期或一次性大量食用色素含量超標的食品，可能會(huì )引起過(guò)敏、腹瀉等癥狀，因而各國都嚴格控制合成著(zhù)色劑的使用范圍和使用量。肉制品中檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅著(zhù)色劑被列為禁用，而you惑紅限用于西式火腿類(lèi)、肉灌腸類(lèi)和可食用動(dòng)物腸衣類(lèi)食品。
本實(shí)驗參考GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂紅著(zhù)色劑測定》以及GB2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》，采用依利特公司生產(chǎn)的高效液相色譜儀，對著(zhù)色劑標準品，線(xiàn)性以及加標回收率等進(jìn)行檢測方法驗證，并且檢測實(shí)際肉制品中檸檬黃、胭脂紅、日落黃、莧菜紅、you惑紅的添加情況。

實(shí)驗方法

1.樣品前處理
1)將切碎的肉樣，用打肉機將肉攪成糊狀，并用均質(zhì)機對肉制品進(jìn)行均質(zhì)化后，精密稱(chēng)取一定量的樣品2.0g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加入20mL石油醚，渦旋1min后，5000r/min離心5min，棄去石油醚上清液，重復操作一次。
2)氮氣吹干剩余石油醚，加入5mL乙醇氨渦旋1min，超聲30min，以10000r/min的速度離心5min，移取上清液至10mL離心管中，重復操作一次，合并上清液。
3)上清液75℃下氮氣吹至2mL左右，水洗轉移至10mL離心管中，用檸檬酸調節PH值至6左右，取8mL樣品上SPE小柱待凈化。
2.SPE小柱的活化
聚酰胺PA-1（6mL/500mg）經(jīng)5mL甲醇和5mL純化水活化后，上樣。
上樣和洗脫：先用2ml純化水沖洗，然后用2mL甲醇-甲酸溶液沖洗，抽干小柱，用5mL5%的氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，于65℃條件下氮氣吹干后，用1mL流動(dòng)相溶解定容后，經(jīng)0.45µm濾膜過(guò)濾，取溶液10μL進(jìn)樣。
3.色譜條件
流動(dòng)相A：0.02mol/L乙酸銨溶液
流動(dòng)相B：甲醇
色譜柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm
柱溫：35℃
流量：1.0mL/min
進(jìn)樣體積：10μL

實(shí)驗結果
1.著(zhù)色劑標準品分析結果

2.標準品線(xiàn)性相關(guān)性
配制濃度分別為0.2µg/mL、0.4µg/mL、0.8µg/mL、2.0µg/mL、4.0µg/mL、8.0µg/mL、20.0µg/mL的著(zhù)色劑的混標工作液，按濃度由低至高進(jìn)樣，以標準品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制校準曲線(xiàn)，著(zhù)色劑的標準溶液線(xiàn)性相關(guān)性結果如下。

結果表明，這5種色素在0.2µg/mL至20.0µg/mL濃度范圍內，儀器檢測具有良好的線(xiàn)性相關(guān)性。
3.小檢出限
以3倍信噪比為儀器的檢出限，所得儀器及方法檢出限如下：

4.加標回收率
采用方法中描述的前處理過(guò)程，對空白、豬肉樣品以及加標樣品進(jìn)行處理后，采集數據，并計算所對應的加標回收率結果見(jiàn)下表。

根據前處理方法，計算得到的各肉制品中著(zhù)色劑的含量見(jiàn)下表：

結論

采用依利特公司EClassical 3100高效液相色譜儀，參考GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂紅著(zhù)色劑測定》以及GB 5009.35-2016《食品中合成著(zhù)色劑的測定》并對實(shí)驗條件做進(jìn)一步優(yōu)化后，對合成著(zhù)色劑標準品以及市售肉制品進(jìn)行檢測，檢測結果表明該系統線(xiàn)性良好，并且儀器靈敏度高、定性和定量準確，良好的儀器精密度，適用于肉制品中著(zhù)色劑的含量測定。

參考文獻

[1]GB 5009.35-2016《食品安全國家標準 食品中合成著(zhù)色劑的測定》
[2]GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂紅著(zhù)色劑測定》
[3]GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》