液相色譜柱操作使用的技術(shù)功能介紹分析
更新時(shí)間:2017-08-28 點(diǎn)擊次數:1667次
液相色譜柱在使用中zui常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高,如果柱壓是在長(cháng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加,屬于正?,F象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高,可能的原因有如下幾點(diǎn):
1、液相色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染。
2、色譜柱頭的填料被樣品污染。
3、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結晶析出。
4、流動(dòng)相pH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結構破壞或溶解。
液相色譜柱解決辦法如下:
1、如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱。
2、如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復后,重新安裝上柱頭螺絲。
3、如確定定是鹽結晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
4、如果因pH值使用不當,很難恢復。
選擇液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類(lèi)型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等,
1、樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2、如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點(diǎn)是離子對試劑平衡時(shí)間長(cháng),對流動(dòng)相pH要求比較精密,否 則很難重復實(shí)驗,另外離子對試劑很難洗下來(lái),基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗)
3、若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會(huì )減少堿性化合物的拖尾,一般會(huì )選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留
4、如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單,缺點(diǎn)是目前實(shí) 現這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價(jià)格也高)或者選用液相色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品,對流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復實(shí)驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。